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抗體是蛋白質(zhì)和分子檢測(cè)與純化的強(qiáng)大工具。盡管完整抗體（通常是 IgG 或 IgM）適用于大多數(shù)免疫分析應(yīng)用，但某些步驟的性能卻通過(guò)使用抗體片段（例如 Fab 和 F（ab'）2）得到了增強(qiáng)。本文概述了制備抗體片段的優(yōu)勢(shì)、類(lèi)型和方法。
有時(shí)，研究或利用免疫球蛋白的部分活性而不受其他分子片段的干擾，是非常有用的?？梢赃x擇性地將免疫球蛋白分子切割成具有離散特征的片段。使用還原劑和蛋白酶消化或切割免疫球蛋白蛋白質(zhì)的部分結(jié)構(gòu)，完成抗體片段化。盡管可以對(duì)所有免疫球蛋白類(lèi)別進(jìn)行片段化，但只有小鼠、兔和人 IgG 和 IgM 片段化的步驟得到了很好地表征。
兩組主要關(guān)注的抗體片段是（a）抗原結(jié)合片段（例如 Fab）和（b）不結(jié)合抗原的可結(jié)晶片段（例如 Fc）。可以得到幾種類(lèi)型的抗原結(jié)合片段，但每種都至少包含重和輕免疫球蛋白鏈（分別為 VH 和 VL）的可變區(qū)，通常通過(guò)二硫鍵結(jié)合在一起以保留抗體結(jié)合位點(diǎn)。Fc 片段由免疫球蛋白的重鏈恒定區(qū)（Fc 區(qū)）組成，并介導(dǎo)細(xì)胞效應(yīng)功能。
抗體片段化有點(diǎn)費(fèi)力，需要優(yōu)化酶介導(dǎo)的蛋白質(zhì)消化，并且需要充足的抗體（例如 10 mg）來(lái)有效實(shí)現(xiàn)。因此，通常僅在可大量獲得目標(biāo)抗體且特定應(yīng)用需要時(shí)才進(jìn)行片段化。
抗體 IgG 結(jié)構(gòu)和裂解位點(diǎn)的片段化。常用的抗體片段可通過(guò)還原鉸鏈區(qū)二硫化物或通過(guò)木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或無(wú)花果蛋白酶消化來(lái)制備，包括半 IgG、Fab、F（ab'）2 和 Fc。
抗體片段的優(yōu)點(diǎn)
抗體片段是整個(gè)抗體分子中的小型功能元件，與完整抗體相比，抗體片段在某些免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和應(yīng)用中具有多種優(yōu)勢(shì)：
①減少了 Fc 相互作用導(dǎo)致的非特異性結(jié)合（許多細(xì)胞具有結(jié)合 Fc 區(qū)的受體）
②在免疫沉淀和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中，控制 Fc 與蛋白 A 或蛋白 G 結(jié)合
③更有效地穿透組織切片，改善免疫組織化學(xué)（IHC）染色
④減少大蛋白質(zhì)表位的位阻，固相應(yīng)用中抗原檢測(cè)的靈敏度可能更高
⑤消除抗原抗體結(jié)合研究中與 Fc 相關(guān)的效應(yīng)功能（例如補(bǔ)體固定）
⑥利用 X 射線(xiàn)晶體學(xué)或 NMR 來(lái)研究免疫識(shí)別結(jié)構(gòu)區(qū)，操作更簡(jiǎn)便
⑦內(nèi)源實(shí)驗(yàn)時(shí)的免疫原性低于完整抗體
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